ОБЩИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ВЗЯТИЮ БИОПРОБ ДЛЯ ПЦР-ДИАГНОСТИКИ
Материалы НПФ Литекс http://www.lytech.ru/Basic/navigator.htm
1. Взятие материала производится из предполагаемого места обитания микроорганизма. Различные микроорганизмы имеют свои особенности локализации, пути распространения и выделения. Это следует учитывать при выборе наиболее адекватного места взятия биопробы.
В связи с тем, что Clamydia trachomatis является внутриклеточным паразитом и размножается только внутри клеток циллиндрического эпителия уретры или цервикального канала для получения адекватного результата необходимо, чтобы исследуемый материал содержал возможно большее количество эпителиальных клеток и минимальное количество слизи и примеси крови. Присутствие в исследуемом материале большого количества слизи и примеси крови могут привести как к ложноположительным, так и ложноотрицательным результатам.
Уреаплазма и микоплазма также тропны к цилиндрическому эпителию уретры и цервикального канала, поэтому правила забора мазков на эти инфекции подобны правилам забора на хламидии.
При гонорее и трихомониазе материал для исследования у женщин следует брать перед менструацией или через 1-2 дня после ее окончания. Перед взятием материала необходимо воздержаться от мочеиспускания в течение 3-4 часов и половых сношений. Женщины накануне обследования не должны проводить туалет наружных половых органов и спринцевание. Исследуемый материал должен быть без примесей крови. Не следует для исследования брать свободно стекающие уретральные выделения. Секрет простаты следует брать только после окончания острых явлений простатита. При вялотекущей и хронической гонорее перед исследованием необходимо провести провокацию.
Методы провокации при гонорее:
- биологическая: введение гоновакцины (500 млн. микробных тел) взрослым однократно, внутримышечно, детям старше 3-х лет - 100-200 млн. микробных тел; детям до 3-х лет введение гоновакцины не рекомендовано;
- термическая: применение в течение 3-х дней диатермии с абдоминально-вагинально-сакральным расположением электродов по 30, 40, 50 мин или индуктотермии по 10, 15, 20 мин; взятие материала лучше всего проводить из уретры, цервикального канала через 1 час после каждого прогревания;
- механическая: наложение металлического колпачка на шейку матки женщин на 4 часа, проведение массажа уретры у мужчин на буже в течение 10 мин;
- алиментарная: употребление соленой, острой пищи и алкоголя за 24 часа до исследования.
Взятие материала производится после провокации и через 24-48-72 часа.
Для получения наиболее достоверных результатов необходимо проведение повторных исследований.
При герпетической инфекции соскобы лучше всего брать с генитальных поражений (везикул, язвочек). При отсутствии генитальных поражений соскоб берется из цервикального канала.
При диагностике цитомегаловирусной инфекции материалом для исследования могут быть мазок из задней стенки глотки, соскобы из влагалища, уретры и цервикального канала, слюна, спиномозговая жидкость.
При диагностике папилломавирусной инфекции материалом для исследования могут быть мазок из носоглотки, с конъюктивы глаза, соскоб из цервикального канала, шейки матки, т.е. слизистых (неороговевающий эпителий).
2. Взятие биологического материала, по возможности, должно проводиться в период обострения инфекции. За 10 дней до взятия материала на исследование необходимо прекратить прием химиопрепаратов и лечебные процедуры. Материал для исследования у женщин следует брать перед менструацией или через 1-2 дня после ее окончания. Женщины накануне обследования не должны проводить туалет наружных половых органов и спринцевание. Взятие биоматериала для контроля эффективности лечения должно проводиться не ранее чем через 3-4 недели после окончания терапии.
3. Количество материала, забираемого для исследования не должно быть избыточным, т.к. вместе с возбудителем в пробу попадают вещества, которые могут вызывать ингибирование ПЦР или могут способствовать деградации ДНК при хранении и транспортировке. При взятии мазков и соскобов достаточное количество материала - размером "со спичечную головку". Наиболее адекватным инструментом для взятия соскобов и мазков для ПЦР-анализа является специальный урогентиальный зонд (щеточка), который собирает необходимое количество эпителия, не травмируя слизистую, почти не впитывает образец и хорошо отдает собранный материал в жидкую транспортную среду.
4. Для взятия биопроб необходимо пользоваться только одноразовым инструментом и одноразовыми пластиковыми контейнерами (или пробирками с транспортной средой) с плотно закрывающейся или завинчивающейся крышкой.
Особенности взятия материала из уретры.
- перед взятием материала пациенту рекомендуется воздержаться от мочеиспускания в течение 1,5-2 часов;
- непосредственно перед взятием материала наружное отверстие уретры необходимо обработать тампоном, смоченным стерильным физиологическим раствором;
- при наличии гнойных выделений соскоб рекомендуется брать через 15-20 мин после мочеиспускания, при отсутствии выделений необходимо провести массаж уретры с помощью зонда для взятия материала;
- у женщин перед введением зонда в уретру проводится ее массаж о лобковое сочленение;
- в уретру у женщин зонд вводится на глубину 1,0-1,5 см, у мужчин - на 3-4 см и затем делается несколько вращательных движений; у детей материал для исследования берут только с наружного отверстия уретры;
Особенности взятия материала из цервикального канала.
- перед взятием материала необходимо удалить ватным тампоном слизь и затем обработать шейку матки стерильным физиологическим раствором;
- зонд вводится в цервикальный канал на глубину 0,5-1,5 см;
- при наличии эрозий цервикального канала необходимо их обработать стерильным физиологическим раствором, и материал следует брать на границе здоровой и измененной ткани;
- при извлечении зонда необходимо полностью исключить его касание со стенками влагалища;
Особенности взятия секрета предстательной железы.
- перед взятием секрета простаты головка полового члена обрабатывается стерильным ватным тампоном, смоченным физиологическим раствором.
- секрет простаты берется после предварительного массажа простаты через прямую кишку. Врач проводит массаж с надавливанием несколькими энергичными движениями от основания к верхушке. Затем из кавернозной части выдавливается простатитческий секрет.
Особенности взятия (сбора) мочи
- мочу собирают утром натощак после сна или не ранее чем через 2-3 часа после последнего мочеиспускания.
- утренняя моча отстаивается в течение 1 часа, затем осторожно сливается, оставляя только придонную часть - около 10 мл. Этот остаток сливают в центрифужную пробирку и центрифугируют. Затем надосадочную жидкость вновь сливают, а осадок (без жидкости) зондом переносят в пробирку для ПЦР.
До получения осадка мочу нельзя охлаждать или замораживать.